Обнаружение кишечной палочки в смывах рук

Новости центра

Онлайн-школа «ЭКОтвет»: 30 апреля 2021 Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова приглашает всех желающих принять участие в седьмой … Читать полностью » День открытых дверей будет проходить в формате-онлайн! в 12:00 Читать полностью » Дополнение в график работы Центра в майские праздники Уважаемые пациенты! От всей души поздравляем вас с наступающим Праздником Весны и Труда и Днем Победы! В связи с Указом Президента России Путина В.В. о выходных днях с 1… Читать полностью »

Виды микробных загрязнений

Изобретение микроскопа положило начало микробиологии, которая не только выявила наличие микроорганизмов, но и установила их связь с возникновением заболеваний у людей. Появились первые научно обоснованные санитарные правила, рекомендации и законы, охраняющие здоровье граждан.

Изучение инфекционных заболеваний людей и животных привело ученых к выводу о том, что источниками заражения являются они сами. Бактерии, являющиеся причиной болезней, попадают на продукты питания, предметы быта с микрочастицами кала или каплями слюны. Так были определены две большие группы бактериальных загрязнений.

1. Оральная группа, представленная микроорганизмами, обитающими в полости рта.
2. Фекальный вид загрязнения бактериями, которые попадают во внешнюю среду из кишечника людей и животных.

Встал вопрос о том, присутствие какого вида бацилл точно свидетельствует об инфекционной опасности объекта или продукта питания. Ведь в кишечнике и ротовой полости сотни различных видов микробов. Была проведена колоссальная работа по выявлению показательных представителей микрофлоры. Определили две группы:

• стафилококки как показатель орального обсеменения;
• бактерии группы кишечной палочки (БГКП) для определения фекального загрязнения.

Во рту могут находиться разные виды стафилококков. Присутствие любого из стафилококков в большом количестве будет свидетельствовать о загрязнении. Но есть среди них особо показательный стафилококк. Это золотистый стафилококк, получивший свое название по цвету колоний, которые он создает на лабораторных средах.

БГКП в отличие от стафилококков составляют разнородные микроорганизмы: цитробактеры, эшерихии, шигеллы, иерсинии и другие бациллы. Их всех роднит между собой похожесть на главного представителя кишечной флоры. Это кишечная палочка. Хотя их свойства похожи, на лабораторных средах они образуют колонии разного вида и цвета.

Среди представителей БГКП эшерихии отличаются по свойствам размножения от цитробактера и энтеробактера. Практически это используется для определения давности микробного обсеменения. Присутствие эшерихий свидетельствует о недавнем загрязнении. Наличие цитробактера или энтеробактера означает, что с момента появления БГКП на исследуемом месте прошло несколько недель.

На основании данных изучения микроорганизмов разрабатывались правила и рекомендации, которые легли в основу создания регламентирующей документации.

• СанПиН – санитарные правила и нормы.
• МУ – методические указания.
• Приказы.
• Санитарные правила.

В них расписаны все действия санитарных служб: периодичность проверок, объекты контроля, рекомендованные методики, использование сред для посева, режимы роста стафилококков или БГКП из смыва. Скрупулезность описания действий в МУ и СанПиН объясняется серьезностью вопроса инфекционной безопасности населения.

Нормы

	Дети до 1 года	Дети старшего возраста	Взрослые
Бифидобактерии	1010–1011	109–1010	108–1010
Лактобактерии	106–107	107–108	106–108
Эшерихии	106–107	107–108	106–108
Бактероиды	107–108	107–108	107–108
Пептострептококки	103–105	105–106	105–106
Энтерококки	105–107	105–108	105–108
Сапрофитные стафилококки	≤104	≤104	≤104
Патогенные стафилококки	отсутствуют	отсутствуют	отсутствуют
Клостридии	≤103	≤105	≤105
Кандида	≤103	≤104	≤104
Патогенные энтеробактерии	отсутствуют	отсутствуют	отсутствуют

Заболевания, при которых врач может назначить бактериологическое исследование кала

1. 1. Острая кишечная инфекция
2. 2. Сальмонеллез

Подготовка к испытанию

4.1 Приготовление растворов

4.1.1 Щелочной раствор бромкрезолового пурпурного концентрацией 10 г/дм: 1 г бромкрезолового пурпурного переносят в фарфоровую ступку с 19 см раствора гидроокиси натрия (NaOH)=0,1 моль/дм и после растворения добавляют 80 см дистиллированной воды.

4.1.2 Раствор бриллиантового зеленого концентрации 5 г/дм: 0,5 г бриллиантового зеленого переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят дистиллированной водой до метки.

4.1.3 Раствор генцианвиолета или кристаллического фиолетового, или метилового фиолетового концентрацией 10 г/дм: 1 г одной из анилиновых красок переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят дистиллированной водой до метки.

4.1.4 Раствор фенолового красного концентрации 2 г/дм: 0,2 г фенолового красного переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят дистиллированной водой до метки.

4.1.5 Растворы, приготовленные по , хранят в закрытых сосудах из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.

4.1.6. Растворы и реактивы для окраски по Граму готовят по ГОСТ 10444.1.

4.2 Приготовление питательных сред

4.2.1 Агар лактозный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным: 3,0 г мясного экстракта, 10,0 г пептона, 10,0 г лактозы, 5,0 г хлористого натрия, 0,5 г фосфорнокислого двузамещенного калия, 15,0 г агара добавляют к 1000 см дистиллированной воды. При отсутствии мясного экстракта допускается использовать вместо мясного экстракта, пептона и дистиллированной воды мясопептонный бульон по ГОСТ 10444.1. Смесь нагревают до полного растворения компонентов, охлаждают до 45-55 °С, устанавливают рН так, чтобы после стерилизации она составляла при 25 °С (7,0±0,1). Среду стерилизуют в течение 20 мин при температуре (115±1) °С, затем охлаждают до 45-55° и прибавляют 40 см раствора фенолового красного, приготовленного по 4.1.4, и 2 см раствора бриллиантового зеленого, приготовленного по 4.1.2, тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри, колбы или флаконы.

4.2.2 Бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью: 10,0 г пептона, 5,0 г лактозы, 6,45 г двузамещенного фосфорнокислого безводного натрия, 2,0 г однозамещенного фосфорнокислого безводного калия, 20,0 г сухой говяжьей желчи или 200 см натуральной желчи, 3 см раствора бриллиантового зеленого, приготовленного по 4.1.2, добавляют к 1000 см дистиллированной воды (в случае использования натуральной желчи к 800 см дистиллированной воды), тщательно перемешивают, нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1-2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до 45-55 °С и устанавливают рН таким образом, чтобы она составляла при 25 °С (7,2±0,1), после чего среду вновь доводят до кипения. Среда не подлежит стерилизации в автоклаве, ее разливают с соблюдением правил асептики по 10 см в стерильные пробирки с поплавками или по 100 см в колбы.

4.2.3 Бульон Мак-Конки: 20,0 г пептона, 10,0 г лактозы, 5,0 г хлористого натрия, 5,0 г сухой говяжей желчи или 50 см натуральной желчи, 1 см раствора бромкрезолового пурпурного, приготовленного по 4.1.1, добавляют к 1000 см дистиллированной воды (в случае использования натуральной желчи к 950 см дистиллированной воды), нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1-2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до 45-55 °С и устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации она составляла при 25 °С (7,2±0,1). Среду разливают по 10 см в пробирки с поплавками или в колбы по 100 см и стерилизуют 15 мин при температуре (121±1) °С.

4.2.4 Среда Кесслер: 10,0 г пептона, 2,5 г лактозы, 5,0 г сухой говяжьей желчи или 50 см натуральной желчи, 2 см раствора генцианвиолета или кристаллического фиолетового, или метилового фиолетового, приготовленного по 4.1.3, добавляют к 1000 см дистиллированной воды (в случае использования натуральной желчи к 950 см дистиллированной воды), тщательно перемешивают, нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1-2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до 45-55 °С, устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации она составляла при 25 °С (7,3±0,2). Среду разливают по 10 см в пробирки с поплавками или в колбы по 100 см и стерилизуют 20 мин при температуре (115±1) °С,

4.2.5 Среда Эндо: выпускается Дагестанским НПО "Питательные среды" и готовится по прописи, указанной на этикетке.

4.2.6 Жидкие среды двойной концентрации готовят по , но при приготовлении берут удвоенную массу (объем) ингредиентов, кроме дистиллированной воды, и разливают в посуду с учетом последующего количества добавляемого жидкого продукта.

Расшифровка результатов анализа на дисбактериоз

Патогенные энтеробактерии – в норме отсутствуют. Их присутствие указывает на острую кишечную инфекцию. Энтеробактерии – сальмонеллы и шигеллы – являются возбудителями серьезного заболевания – дизентерии.

Бифидобактерии – обеспечивают расщепление и переваривание пищи, усвоение железа, нейтрализацию токсинов. Норма – 109-1010 КОЕ/г, у детей первого года жизни 1010-1011. Существенное снижение количества бифидобактерий – явный признак дисбактериоза.

Лактобактерии – расщепляют лактозу, поддерживают необходимый уровень кислотности толстой кишки, повышают активность фагоцитов – клеток иммунной защиты. Норма: 107-108 КОЕ/г, у детей первого года жизни 106-107.

Кишечная палочка () с нормальной ферментативной активностью – препятствует развитию условно-патогенной микрофлоры, вырабатывает витамины группы B, способствует усвоению железа и кальция. Нормальное значение: 107-108 КОЕ/г. Результат ниже нормы может указывать на наличие кишечных паразитов – глистов.

Кишечная палочка () со сниженной ферментативной активностью – не причиняет вреда, но и не приносит никакой пользы. В норме кишечная палочка с подобными свойствами должна составлять не более 105 КОЕ/г. Увеличение ее количества является признаком начинающегося дисбактериоза.

Гемолитические кишечные палочки () – способны вырабатывать токсины. В норме должны отсутствовать.

Нормы по условно-патогенным микроорганизмам:

• микробы рода протея – менее 102;
• условно-патогенные энтеробактерии – менее 104;
• энтерококки – 105-108, у детей до года 105-107;
• стафилококк золотистый () и др. гемолитические стафилококки – отсутствуют;
• стафилококки (сапрофитные, эпидермальный) – менее 104;
• грибы рода Candida – менее 103;
• бактероиды – менее 107;
• клостридии – не более 105.

Записаться на диагностикуНе занимайтесь самолечением. Обратитесь к нашим специалистам, которые правильно поставят диагноз и назначат лечение.Оцените, насколько был полезен материал 0 Спасибо за оценку